R1000 RNA Transfection Reagent

產(chǎn)品簡介：

R1000 RNA Transfection Reagent是一種獨有的RNAi特異性陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，本品推薦用于將siRNA、microRNA(miRNA)、mimic、inhibitor 等小片斷RNA 轉(zhuǎn)染入動物細胞（包括各種細胞系、原代細胞、懸浮細胞、昆蟲細胞等）。本產(chǎn)品可以常溫運輸，在多種細胞系的驗證中均表現(xiàn)了很好的RNA 轉(zhuǎn)染效率，并有很低的細胞毒性。

產(chǎn)品特點：

1.超高的轉(zhuǎn)染效率，且所需RNAi 濃度低，基因抑制效果更好，非特異性效應(yīng)極少

2.針對miRNA 拮抗劑和模擬物具有出色的轉(zhuǎn)染效率

3.細胞毒性低、易于優(yōu)化

4.可用于多種細胞類型

5.簡單、高通量的即用型轉(zhuǎn)染

使用方法：

(不同的細胞已及轉(zhuǎn)不同面積的孔板操作起來略有不同，以24 孔板siRNA 轉(zhuǎn)染為例)。

1.提前一天細胞種植

貼壁細胞：提前一天將細胞種植在24 孔板中，以轉(zhuǎn)染時細胞匯合度在30％左右為宜，轉(zhuǎn)染前全培養(yǎng)基總量為0.45ml。

懸浮細胞：采用對數(shù)生長期的細胞，數(shù)量為常規(guī)培養(yǎng)細胞數(shù)的1/3 進行轉(zhuǎn)染實驗。

2.轉(zhuǎn)染過程

⑴取0.67ug(50pmol)的siRNA，加入無血清稀釋液，充分混勻，制成RNA稀釋液，終體積為25μl。

注意：無血清稀釋液建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM 或1640。

⑵取1ul 的R100，然后加入24ul 無血清稀釋液體，充分混勻，制成R100 稀釋液，終體積為25μl。室溫靜置5 分鐘。

⑶將R100 稀釋液和RNA 稀釋液充分混合（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10 次以上）混合，室溫靜置15 分鐘。轉(zhuǎn)染復(fù)合物制備完成。

⑷將50μl 轉(zhuǎn)染復(fù)合物滴加到有0.45ml 全培養(yǎng)基（可含10%血清和抗生素）的細胞上，混合均勻。

⑸轉(zhuǎn)染后6 小時觀察細胞狀態(tài)，如狀態(tài)良好可不必更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24-96小時得到結(jié)果。

注意：

1.siRNA 轉(zhuǎn)染后，繼續(xù)培養(yǎng)24-72 小時在mRNA 水平得到結(jié)果，繼續(xù)培養(yǎng)24-96 小時在蛋白水平得到結(jié)果。mRNA 轉(zhuǎn)染后，根據(jù)需要在24 小時后得到結(jié)果。

2.由于血清和培養(yǎng)條件等差異，轉(zhuǎn)染后鏡下培養(yǎng)基中可能出現(xiàn)少量黑點狀沉淀，為轉(zhuǎn)染試劑和血清中蛋白結(jié)合產(chǎn)物，不影響轉(zhuǎn)染結(jié)果和細胞狀態(tài)，可通過換液除去。

不同細胞培養(yǎng)容器轉(zhuǎn)染推薦用量

3.優(yōu)化

由于RNA 序列差異、合成條件不同以及是否帶有熒光等標(biāo)記，決定了RNA 和轉(zhuǎn)染試劑在不同情況下會有不同的最佳條件，建議先進行預(yù)實驗優(yōu)化。

RNA 濃度和轉(zhuǎn)染試劑量的優(yōu)化(24well)

                    此方案僅供參考

根據(jù)優(yōu)化實驗結(jié)果，固定RNA(μg):轉(zhuǎn)染試劑量(μl)的比值，按培養(yǎng)器皿表面積比例應(yīng)用到其他培養(yǎng)容器。

包裝規(guī)格：

保存溫度:

冰袋或者濕冰運輸，短時間內(nèi)可室溫運輸，但需避免光源熱源，長時間儲存于4℃，切勿凍存。