產(chǎn)品詳情:
RIPA裂解液是最可靠的緩沖液之一,其主要成分含1% NP-40, 0.5% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS,該緩沖液能夠從細(xì)胞質(zhì),膜和核蛋白質(zhì)中提取蛋白質(zhì),并且與許 多應(yīng)用相容,包括蛋白質(zhì)分析,和蛋白質(zhì)純化。RIPA緩沖液不含蛋白酶或磷酸酶,如果需要,可將酶添加到試劑中以防止蛋白質(zhì)水解并維持蛋白質(zhì) 的磷酸化狀態(tài)。一些蛋白激酶和其他酶可能對(duì)RIPA緩沖液的組分敏感,導(dǎo)致其活性降低。 在這種情況下,準(zhǔn)備不含脫氧膽酸鈉和SDS的RIPA緩沖液。
注意事項(xiàng):
1.抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
2.裂解得到的蛋白樣品,含有較高濃度的去垢劑,不建議用Bradford 法測(cè)定蛋白濃度,可以選用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。
3.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過(guò)超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見(jiàn)的轉(zhuǎn)錄因子,例如NFKB、p53等時(shí),通常不必進(jìn)行超聲處理,就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。