發(fā)布時(shí)間:2020-05-07
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增強(qiáng)型轉(zhuǎn)染試劑是在前幾代轉(zhuǎn)染試劑的基礎(chǔ)上再次創(chuàng)新,包含最為先進(jìn)的脂質(zhì)體納米顆粒技術(shù),追求更優(yōu)越的轉(zhuǎn)染性能。增強(qiáng)型轉(zhuǎn)染試劑具有更好的轉(zhuǎn)染效率,并提高細(xì)胞活性,適用于較難轉(zhuǎn)染及常見細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。
操作步驟:(以六孔板的貼壁細(xì)胞DNA轉(zhuǎn)染為例)
1. 細(xì)胞準(zhǔn)備。轉(zhuǎn)染前一天將細(xì)胞接種至六孔板內(nèi),細(xì)胞接種數(shù)量視其生長(zhǎng)速度和細(xì) 6 胞系類型而定,一般為0.5-1×10 個(gè)細(xì)胞。轉(zhuǎn)染時(shí)要求細(xì)胞生長(zhǎng)的匯合度為70~90%,轉(zhuǎn) 染前兩小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液。(細(xì)胞狀態(tài)與轉(zhuǎn)染效果影響很大,選擇最佳的細(xì)胞狀態(tài)更有利于轉(zhuǎn)染效率提高和轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài)的恢復(fù));
2. 將3.75μl和7.5μl的RZ523-Lipo增強(qiáng)轉(zhuǎn)染試劑分別加至另外125μl無(wú)血清的OPTI-MEM培養(yǎng)基中,輕輕混勻,室溫靜置2-3分鐘;
3. 將5μg質(zhì)粒DNA (0.5-5μg/μL) 加入到250μl無(wú)血清OPTI-MEM培養(yǎng)基稀釋,制備DNA 預(yù)混液勻,然后添加10 μl RZ523-Lipo輔助試劑并充分混勻;
4. 在每管已稀釋的RZ523-Lipo增強(qiáng)轉(zhuǎn)染試劑中加入等體積稀釋的 DNA孵育10-15分鐘;
5.將DNA和RZ523-Lipo增強(qiáng)轉(zhuǎn)染試劑混合液滴加至六孔板的孔內(nèi),前后左右晃動(dòng)孔板混勻,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6.轉(zhuǎn)染18-48小時(shí)后,倒置熒光顯微鏡下觀察熒光蛋白表達(dá),或加入抗性培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系單克隆。